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摘要
通过启动子优化构建了适用于DF-1细胞的CRISPR载体；随后通过同时共转靶向GgLDHA的2条sgRNAs，获得了13株GgLDHA基因突变型细胞株，其蛋白表达水平和酶活出现不同程度的下降。通过对突变克隆细胞株生长、葡萄糖和乳酸代谢、能量代谢以及IBDV增殖研究发现，乳酸对葡萄糖得率从2.1显著下降为1.6，腺苷三磷酸（ATP）合成速率明显提高，相比对照细胞最高提高了57%，突变细胞株的能量代谢效率获得了有效改善。突变型细胞株的IBDV滴度较野生型均有明显增加，相比对照最大提高了5倍。通过定向突变GgLDHA基因，明显降低了DF-1细胞的乳酸积累，有效改善了细胞的能量代谢，并显著促进了IBDV病毒的增殖，为提高IBDV病毒疫苗的生产能力提供了一种新思路。
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单位生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学
