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摘要
为筛选小麦叶锈菌效应蛋白的互作靶标蛋白，解析效应蛋白干扰寄主的防御反应机制。本试验以小麦叶锈菌菌株13-5-28-1(JHKT)与感病品种Thatcher在0-12 d互作的供试样本为材料，利用SMART方法构建三框均一化的、用于筛选与小麦叶锈菌互作的小麦cDNA文库，采用同源重组的方法构建效应因子Pt34084重组诱饵载体pGBKT7-Pt34084，并以其为诱饵蛋白，利用共转化方法筛选互作的靶标蛋白。结果表明，构建的小麦叶锈菌与小麦互作的cDNA文库库容约1.05×107 CFU/mL，滴度为1.2×109 CFU/mL，平均插入片段大于1 kb，重组阳性率为100%，符合cDNA建库要求。构建的诱饵重组载体pGBKT7-Pt34084在SD/-Trp-His-Ade培养基中添加20 mmol/L 3-AT及400 ng/mL ABA可抑制其自激活性。利用该文库共筛选获得16个来自小麦及叶锈菌的不同候选互作蛋白，这些蛋白涉及植物代谢、激素信号转导、抗病反应等多个方面。预示Pt34084可通过多种渠道干扰寄主的防御反应，促进叶锈菌侵染。研究结果有助于解析小麦叶锈菌致病机理，为创造新的有效防控小麦叶锈菌策略奠定基础。
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