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摘要
目的：分离鼠肾脏肾小球并进行原代培养，进一步分选出足细胞，为足细胞相关疾病的研究提供新的技术支持。方法：将mTmG（+）小鼠与Cre（+）小鼠杂交后，获得基因型为mTmG(+)Cre（+）的子代。出生10～15 d后取小鼠肾脏，通过差异过筛法分离肾小球，倒置相差显微镜观察分离的肾小球。用原代细胞培养基重悬肾小球，置于37℃5%CO2培养箱中培养，定期进行细胞换液和传代培养，倒置相差显微镜下观察细胞的形态与生长状况，倒置荧光显微镜下观察细胞的荧光种类及其比例，通过流式细胞术对足细胞进行计数与分选。结果：成功构建基因型为mTmG(+)Cre（+）小鼠，使用差异过筛法可分离出肾小球，在倒置相差显微镜下可观察到分离的肾小球，倒置荧光显微镜下可见带有绿色荧光的足细胞和带有红色荧光的非肾小球足细胞，流式细胞术可分选出呈现绿色荧光的足细胞，进行细胞计数，并收集分选后的足细胞。结论：使用mTmG（+）小鼠与Cre（+）小鼠进行杂交，获得足细胞表达特异性荧光的小鼠，通过差异过筛法、原代细胞培养、流式细胞术分选等一系列技术，可有效分离出小鼠肾脏足细胞。
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单位武汉大学人民医院
