含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定

作者：叶建新; 仉元亭; 陈卫昌; 张学光; 任大明

来源：中国免疫学杂志, 2009, 25(04): 336-339+345.

• 4-1BBL基因
• 减毒沙门氏菌
• DNA疫苗 4-1BBL gene
• Attenuation Salmonella typhimurium
• DNA vaccine

目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染S...

• 单位
  复旦大学; 苏州大学; 遗传工程国家重点实验室