重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的制备与分析

作者：王俊虹; 杨帆; 魏茂提; 徐忠伟

来源：武警后勤学院学报(医学版), 2015, 24(09): 696-699.

DOI：10.16548/j.2095-3720.2015.09.005

• 蓖麻毒素
• 相思子毒素
• B链
• 嵌合体
• 抗原性

【目的】观察蓖麻毒素(ricin toxin,RT)、相思子毒素(abrin toxin,AT)B链的嵌合体蛋白原核表达并分析其抗原性和毒性。【方法】利用柔性linker-(G4S)3连接两个毒素B链基因(RTB和ATB),优化嵌合体基因RTB-ATB后构建表达质粒p QE80LRTB/ATB,转化至E.coli M15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western印迹检测RTB-ATB的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行嵌合体蛋白的细胞毒性实验。【结果】RTB-ATB全长1 647bp,编码549个氨基酸残基;E.coli M15在诱导条件为30℃、1 mmol/L IPTG,3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子量约为60×103Da,经Ni柱纯化后纯度达98.9%;Western blotting印迹结果表明嵌合体蛋白保持RTB和ATB原有各自的抗原性;MTS实验结果表明目的蛋白无毒性。【结论】嵌合体蛋白RTB-ATB实现高表达,具有良好的抗原性,为研制针对RT和AT的双价疫苗奠定基础。

• 单位
  武警后勤学院; 中心实验室