结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0827c(KmtR)调控靶点的初步研究

作者：王慧; 崔莹莹; 唐祎依; 吕明月; 党光辉; 崔子寅; 曹俊; 宋宁宁; 刘思国^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(08): 823-830.

• 结核分枝杆菌
• 转录调控蛋白Rv0827c
• rv3616c

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化，从而形成持续感染，但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况，明确Rv0827c与已确定基因rv3616c启动子结合的影响因素，本研究利用PCR从MTB H37Ra株基因组DNA中扩增rv0827c基因后构建重组质粒pET-22b-rv0827c，经IPTG诱导表达和纯化后获得重组蛋白Rv0827c(rRv0827c)，同时以MTB H37Ra株基因组为模板扩增23种基因的启动子。通过体外凝胶迁移试验(EMSA)和体内染色质免疫共沉淀试验(ChIP)对rRv0827c与这23种基因启动子的相互作用及其互作区域进行检测，结果显示，rRv0827c与23种启动子DNA均能结合，且rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA，并结合于其大沟区域；通过EMSA对影响rRv0827c和rv3616c启动子DNA结合的金属离子进行筛选显示，Ni2+、Co2+在体外抑制rRv0827c与rv3616c启动子的结合，而Cr3+则促进二者的结合；表面等离子共振试验(SPR)也进一步验证rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA；利用MEME软件分析23种启动子DNA核苷酸序列的保守性，结果显示，4G和10G为rv3616c启动子DNA与rRv0827c互作的关键核苷酸位点。本研究首次揭示了rRv0827c与多基因启动子DNA结合的广泛性，且直接调控rv3616c的表达，进而可能影响MTB的毒力。这对完善Rv0827c的调控网络及深入解析Rv0827c的调控功能奠定了理论基础。

• 单位
  潍坊医学院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室