大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：龚志远; 张梦瑶; 金宏丽; 黄培; 张海丽; 李媛媛; 王化磊^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(04): 407-417.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003553

• 大肠埃希菌
• 不耐热肠毒素B亚基
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的 原核表达大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基（heat-labile enterotoxin B subunit,LTB），并制备其多克隆抗体。方法 利用PCR技术扩增LTB基因，并将其连接至pET30a（+）原核表达载体，构建重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His，转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达，并对目的蛋白表达条件进行优化。利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白，免疫大耳白家兔制备兔源抗LTB多克隆抗体。结果 重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His经双酶切及测序鉴定证明构建正确；表达的重组LTB蛋白相对分子质量约为13 000，以包涵体形式表达，最佳诱导条件为：用0.4 mmol/L IPTG于30℃诱导4 h；纯化后蛋白浓度为3.7 mg/m L；制备的多克隆抗体可用于LTB的Western blot及IFA检测。结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了重组LTB蛋白，并制备了具有良好反应原性和特异性的多克隆抗体，为产肠毒素型大肠埃希菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）疾病的诊断及LTB黏膜免疫佐剂特性的研究奠定了基础。

• 单位
  吉林大学