响应面法优化嗜热链球菌AR333电转化条件

作者：石俊康; 贺紫瑾; 连若琪; 李晓凤; 孔令慧; 艾连中; 熊智强^*

来源：微生物学通报, 2020, 47(05): 1634-1642.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.191042

• 响应面法
• 嗜热链球菌
• 电转化
• 转化效率

【背景】嗜热链球菌AR333是本实验室从发酵乳中筛选出的一株高产活性胞外多糖乳酸菌。【目的】建立嗜热链球菌AR333高效电转化体系。【方法】通过单因素试验和Box-Behnken响应面法优化电转化条件。【结果】嗜热链球菌AR333最优电转化条件为甘氨酸浓度8.3g/L,OD600为0.8,10%甘油(体积比)和0.5 mol/L蔗糖的电转缓冲液,pIB184质粒80 ng,电场强度14 kV/cm,0.4 mol/L山梨醇、2 mmol/L CaCl2和20 mmol/L MgCl2的LM17复苏培养基,复苏时间5 h。【结论】在最优电转化条件下,嗜热链球菌AR333电转化效率达到3.68×105 CFU/μg-DNA,比优化前提高了14倍,实现了嗜热链球菌AR333的高效遗传转化,为其功能解析和基因工程改造奠定基础。

• 单位
  上海理工大学