蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨

作者：刘宝琴; 宗志红; 李超; 孔德慧; 李思; 王华芹

来源：中华肿瘤防治杂志, 2014, 21(18): 1395-1399.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2014.18.002

• 肝肿瘤
• 蛋白酶体抑制剂
• 硼替佐米
• BAG3
• JNK
• SP600125
• HepG2细胞
• 印迹法,蛋白质

目的:探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezome,BZ)、环氧甲酮四肽(epoxomycin,Epox)、乳孢素(lactacystin,Lacta)和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125,对肝癌HepG2细胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制。方法:空白对照、100nmol/L BZ、100nmol/L Epox、500nmol/L Lacta和2μmol/L MG132单独或联合50μmol/L SP600125处理HepG2细胞;实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mRNA表达水平影响,蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响;利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率,Hoechest33258染色检测细胞凋亡率。结果:蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA和蛋白表达水平,而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调。MTT结果显示,SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性;进一步Hoechst33258染色结果显示,4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为(49.2±3.2)%、(58.7±3.5)%、(56.8±3.4)%和(53.4±3.3)%,明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的(7.2±2.8)%、(16.7±3.2)%、(12.3±2.9)%和(11.4±3.0)%,P<0.05。结论:蛋白酶体抑制剂通过JNK信号通路上调BAG3的表达,抑制JNK活性增加了HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性。

• 单位
  基础医学院; 中国医科大学; 中国医科大学附属第一医院