转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株的构建

作者：刘志恒; 祝畅; 桂伶俐; 姚文龙; 张传汉

来源：中华麻醉学杂志, 2006, 26(8): 756-759.

DOI：10.3760/j.issn:0254-1416.2006.08.024

• I-κB
• 神经元
• 基因表达

目的 构建转IκBα突变型基因永生化神经前体细胞株(INPCs).方法 限制性内切酶双酶切含IκBα突变型基因的质粒pBluescript/CNP/IκBαM,得到目的 基因片断IκBα突变型基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切反应及DNA测序鉴定重组载体pcDNA3.1/IκBαM.利用脂质体介导的基因转染技术分别将载体pcDNA3.1及pcDNA3.1/IκBαM转染INPCs,经G418(150μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养,2周后用RT-PCR和Western blot检测阳性细胞株中IκBα的表达,用受NF-κB特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测阳性细胞株中NF-κB的活性.结果 经限制性酶切分析及DNA测序证实重组载体pcDNA3.1/IκBαM中含有IκBα突变型基因,转pcDNA3.1/IκBαM永生化神经前体细胞中IκBα的总mRNA表达增高,Western blot可检测到突变型IκBα蛋白的表达,且细胞中NF-κB活性下降.结论 成功构建了转IκBα突变型基因INPCs,该细胞株能通过IκBα突变型基因的表达来下调NF-κB的活性.

• 单位
  深圳市第二人民医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院