牛病毒性腹泻病毒多表位基因疫苗的构建及其免疫效果评价

作者：赵微; 张东超; 陈婷; 何敬文; 扈立伟; 任君; 卢宝平; **; 包利霞; 顾天越; 金天明^*

来源：畜牧与兽医, 2022, 54(10): 102-110.

• BVDV
• 表位预测
• E0基因
• E2基因

旨在构建牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列，利用生物学方法预测其B、T细胞表位；将获得的序列进行连接，重组获得新肽段(命名为AKK),通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构；PCR分别扩增上述基因序列，构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞，通过蛋白免疫印迹。经PCR扩增获得2 910、1 170、951和729 bp大小的目的条带，与预计相符；经蛋白免疫印迹验证，在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达；经流式细胞术验证显示，在CD3+、CD4+细胞占比上，共表达组极显著高于PBS组，显著高于E0组，与ELISA检测IgG抗体水平结果一致。研究表明，试验成功设计了BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体，AKK、E0、E2蛋白高效表达，共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答。

• 单位
  天津市农业科学院; 天津农学院