科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起重症手足口病的主要病原体,目前缺少有效的抗病毒药物。本研究利用EV71 VP1蛋白作为抗原,筛选免疫小鼠脾脏特异性表达EV71抗体的B细胞。方法 将EV71 VP1基因进行密码子优化,构建至pET-21a(+)表达载体,并转化到大肠埃希菌BL21-DE3,优化蛋白表达和复性条件,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达,并检测其抗原性;以纯化蛋白为抗原,通过流式细胞术对灭活病毒免疫小鼠的B淋巴细胞进行分选,用于单克隆抗体的制备。结果 EV71 VP1基因在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达,纯化复性后的蛋白具有良好的免疫原性;利用表达的VP1蛋白从免疫和未免疫的昆明小鼠脾脏筛选出能够特异性表达EV71抗体的B细胞,两者数量差异具有统计学意义。结论 成功获得免疫原性良好的EV71 VP1重组蛋白,与流式细胞术结合可用于EV71特异B细胞的检测和分选。
- 单位
