紫草素联合G9a抑制剂CM-272促进非小细胞肺癌A549细胞凋亡及其可能机制

作者：贺千羽; 尹逊哲; 张佳馨; 李畅; 郭向宇; 姚池; 刘作家^*; 郭焱^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2023, 37(05): 353-360.

• 非小细胞肺癌
• 紫草素
• CM-272
• 自噬
• 细胞凋亡
• 糖酵解

目的 探讨紫草素联合G9a抑制剂CM-272对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法 紫草素(0.03125～4.0μmol·L-1)和CM-272(0.0625～8.0μmol·L-1)单独作用于A549细胞24 h，用CCK-8法检测细胞存活率并计算IC50值；紫草素(0.5,1.0和2.0μmol·L-1)与CM-272(0.25μmol·L-1)联合作用于A549细胞24 h，用CCK-8法检测细胞存活率并用CompuSyn软件计算联用指数(CI)，确定两者协同作用最强的浓度。紫草素(0.4μmol·L-1)和CM-272(0.05μmol·L-1)单独或联合作用于A549细胞16 d，克隆形成实验检测细胞增殖能力。紫草素(2.0μmol·L-1)和CM-272(0.25μmol·L-1)单独或联合作用于A549细胞24 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，Seahorse XF糖酵解压力测试试剂盒检测细胞糖酵解和最大糖酵解能力的变化，Western印迹法检测细胞信号通路相关蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(Akt)和p-Akt，自噬相关蛋白p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)，凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素c(Cyto-c)和活化胱天蛋白酶8蛋白表达水平。结果 紫草素和CM-272单用抑制A549细胞存活的IC50值分别为3.175和0.241μmol·L-1，紫草素2.0μmol·L-1与CM-2720.25μmol·L-1协同作用最强(联用指数为0.512)。与细胞对照组相比，紫草素(0.4μmol·L-1)和CM-272(0.05μmol·L-1)单用组A549细胞克隆数降低(P<0.01)；与两者单用组相比，两者联用组细胞克隆数进一步降低(P<0.01)。与细胞对照组相比，紫草素(2μmol·L-1)和CM-272(0.25μmol·L-1)单用组A549细胞凋亡率升高(P<0.01)；与两者单用组相比，两者联用组A549细胞凋亡率进一步升高(P<0.01)。与细胞对照组相比，紫草素(2.0μmol·L-1)和CM-272(0.25μmol·L-1)组糖酵解和最大糖酵解能力显著降低(P<0.05)，两者联用组与两者单用组相比糖酵解能力和最大糖酵解能力进一步降低(P<0.05)。与两者单用组相比，两者联用组活化胱天蛋白酶8表达水平显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值显著升高(P<0.01);mTOR和Akt磷酸化水平显著下降(P<0.01);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著上升(P<0.05),p62表达水平显著下降(P<0.01)。结论紫草素联合G9a抑制剂CM-272可协同抑制A549细胞增殖，其机制可能与活化促凋亡蛋白、降低细胞糖酵解能力及调控自噬有关。

• 单位
  吉林省产品质量监督检验院; 长春中医药大学; 中国科学院长春应用化学研究所; 电分析化学国家重点实验室