猪流行性腹泻病毒和猪德尔塔冠状病毒双重TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

作者：李金海; 李兴玉^*; 康润敏; 肖璐; 于吉锋; 叶勇刚; 林毅; 谢晶; 曹冶; 潘梦

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-7.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230807.002

• 猪流行性腹泻病毒
• 猪德尔塔冠状病毒
• 双重TaqMan荧光RT-PCR

本研究旨在建立一种能同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)和猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacortonavirus，PDCoV)的双重TaqMan荧光RT-PCR方法。根据PEDV的N基因和PDCoV的M基因，设计合成特异性引物及TaqMan探针，通过反应条件和反应体系优化，建立快速检测PEDV和PDCoV的双重TaqMan荧光RT-PCR方法，对该方法的灵敏性和特异性进行评价。结果表明，该方法的检测灵敏度可达10 TCID50/ml；当PEDV和PDCoV病毒液效价在101～106 TCID50/ml范围内时，建立的标准曲线Ct值与病毒液浓度的常用对数呈现良好的线性相关；与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等常见病原不发生交叉反应，具有很好的特异性。用建立的方法对2021-2022年收集的236份临床腹泻样品进行检测，PEDV阳性率45.76%(108/236)，PDCoV阳性率14.41%(34/236)，其中PDCoV和PEDV混合感染阳性率5.08%(12/236)，本研究建立的双重TaqMan荧光RT-PCR方法可实现PEDV和PDCoV的同时鉴别检测，为实验室快速鉴别诊断猪病毒性腹泻提供了有效的技术支持。

• 单位
  四川省畜牧科学研究院; 西昌学院; 动物科学学院