抗SARS-CoV-2 N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作者：刘江丽; 李盈盈; 王佳雯; 许喻鈞; 张艳; 黄江涛; 胡祖权^*; 曾柱^*

来源：安徽医科大学学报, 2022, 57(03): 429-437.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.03.017

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 核衣壳蛋白
• 单克隆抗体
• 免疫学检测

目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性。方法 利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白，通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合，采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株，并鉴定其亚型，腹水法制备mAbs, Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性。结果 获得5株能稳定分泌抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株，分别命名为N1～5。通过腹水法制备获得5个mAbs，亚型鉴定结果显示1个为IgG2a*κ型、4个为IgG1*κ型，其效价均达到2×104以上。Western blot结果表明5个mAbs都能与重组SARS-CoV-2 N蛋白结合。结论通过杂交瘤技术成功制备了5个能特异性识别重组SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs，为开发免疫诊断试剂奠定了基础。

• 单位
  贵州医科大学