烟草4种病毒的多重RT-PCR检测方法构建

作者：杨洋; 汪蝶; 杨懿德; 李林秋; 鄢敏; 杨辉^*

来源：烟草科技, 2020, 53(09): 6-11.

DOI：10.16135/j.issn1002-0861.2020.0075

• 烟草
• 病毒检测
• 多重PCR
• TMV
• CMV
• PVY
• TVBMV

为有效鉴定烟草的主要病毒,包括烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV),建立了一种同时检测这4种病毒的多重RT-PCR检测方法。通过人工接种4种病毒试验,发现TVBMV在混合侵染中受TMV、CMV和PVY的拮抗作用。为提高4种病毒复合侵染下TVBMV的检测灵敏度,筛选出TVBMV中表达水平最高的PIPO基因,利用该基因结合TMV、CMV和PVY的CP基因,基于保守区域设计引物,并优化引物及模板的浓度,在一个PCR反应体系中稳定扩增获得大小分别为700、452、275和235 bp的产物。该方法实现了对多种病毒的同时检测,适用于目前大部分烟区田间病毒复合侵染的监控。

• 单位
  四川农业大学; 四川省烟草公司宜宾市公司