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摘要
目的探讨circ LARP4在肝癌组织中表达水平及其对肝癌细胞增殖、周期和侵袭的影响及其分子机制。方法选取2019年1月到2022年1月我院手术切除的71例肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肝癌组织和癌旁组织circ LARP4表达水平。分别采用circ LARP4短发卡RNA(shRNA)和circ LARP4过表达慢病毒感染Huh7细胞, 构建对照组和circ LARP4组细胞系。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和异体移植瘤检测细胞增殖能力;采用流式细胞术测定细胞的周期变化;采用Transwell测定细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞增殖、周期和侵袭相关的蛋白表达水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circ LARP4的靶基因, 采用荧光定量PCR分析circ LARP4对其靶基因表达水平的影响。结果癌旁组织中circ LARP4表达水平(1.37±0.16)明显高于肝癌组织(0.41±0.16), 差异有统计学意义(t=35.110, P<0.05)。对照组细胞48 h和72 h吸光度值(1.37±0.16;2.02±0.06)明显高于circ LARP4组(0.81±0.10;1.48±0.09, 差异有统计学意义(t=7.520、12.371, P<0.05)。对照组细胞在裸鼠中生长速度明显高于circ LARP4组细胞, 差异有统计学意义(F=11.710, P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白表达水平(1.72±0.18)明显高于circ LARP4组细胞(0.85±0.09), 差异有统计学意义(t=11.920, P<0.05)。对照组细胞G0/G1期细胞比例(49.24±3.12)明显低于circ LARP4组细胞(63.07±2.26), 差异有统计学意义(t=9.486, P<0.05)。对照组细胞S期细胞比例(16.35±1.59)明显低于circ LARP4组细胞(27.07±4.48), 差异有统计学意义(t=5.959, P<0.05)。对照组细胞细胞周期D1(Cyclin D1)表达水平(1.35±0.09)明显高于circ LARP4组细胞(0.77±0.11), 差异有统计学意义(t=11.130, P<0.05)。对照组细胞侵袭数量(142.71±23.91)明显高于circ LARP4组细胞(75.86±8.99), 差异有统计学意义(t=6.927, P<0.05)。对照组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-3表达水平(1.08±0.16)明显高于circ LARP4组细胞(0.49±0.14), 差异有统计学意义(t=7.269, P<0.05)。circ LARP4与miR-367存在潜在结合能力。对照组细胞miR-367表达水平(1.28±0.15)明显高于肝癌组织(0.54±0.10), 差异有统计学意义(t=35.110, P<0.05)。结论 circ LARP4通过靶向miR-367, 进而调节着肝癌细胞的增殖、周期和侵袭等恶性细胞生物学行为。
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单位新乡医学院第一附属医院
