重组人Ⅲ型胶原蛋白的分离纯化

作者：梁鑫^*; 张仁怀; 吕自力; 艾华伟; 刘冬; 梁波; 单旭东; 陈浩然

来源：食品与发酵工业, 2020, 46(16): 159-163.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023967

• 毕赤酵母
• 重组人Ⅲ型胶原蛋白
• 盐析
• 阳离子交换层析

利用分泌表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的毕赤酵母发酵液,通过层析条件的优化,建立了重组人Ⅲ型胶原蛋白一步层析纯化工艺。发酵液以硫酸铵(30%饱和度)沉淀胶原蛋白,沉淀用超纯水复溶后超滤转换介质至20 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer,PB)(pH 6.0),然后用SP Sepharose HP阳离子交换柱进行纯化,以20mmol/L PB (pH 6.0)-150 mmol/L NaCl洗涤杂蛋白,以20 mmol/L PB (pH 6.0)-250 mmol/L Na Cl洗脱重组人Ⅲ型胶原蛋白。采用该工艺对60 L发酵液进行重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化,产品纯度97.7%,总回收率68.8%,纯化的重组人Ⅲ型胶原蛋白纯度高,热原含量低,可用于医药领域。该研究建立了一步层析法从毕赤酵母发酵液中高效制备重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化工艺,工艺简便、稳定可靠,离子交换层析放大容易,为重组人Ⅲ型胶原蛋白的工业化生产奠定了基础。

• 单位
  成都中医药大学; 成都远睿生物技术有限公司; 四川省人口和计划生育科学研究所; 生命科学学院