细粒棘球蚴EgG1Y162-2基因的克隆、蛋白表达及纯化鉴定

作者：孔慧芳; 赵商岐; 周彦霞; 龚巧巧; 李玉娇; 曹春宝; 马海梅; 丁剑冰; 周晓涛^*

来源：中华地方病学杂志, 2021, 40(08).

• 细粒棘球蚴
• EgG1Y162-2蛋白
• 表达
• 纯化

目的构建细粒棘球蚴pET30a-EgG1Y162-2原核表达重组质粒, 诱导表达EgG1Y162-2重组蛋白, 为研制细粒棘球蚴疫苗提供研究基础。方法以细粒棘球蚴cDNA为模板, 利用PCR法合成EgG1Y162-2目的基因, 经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后连接到原核表达载体pET30a中, 构建pET30a-EgG1Y162-2重组质粒;将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中, 经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达大量蛋白, 采用亲和层析方法纯化重组蛋白;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白纯化水平, 蛋白免疫印迹(Western blot)法鉴定表达产物。结果成功构建pET30a-EgG1Y162-2重组质粒, 诱导表达后菌体上清液和洗脱液均在相对分子质量约15 × 103处出现EgG1Y162-2蛋白目的条带, 且200 mmol/L咪唑洗脱的蛋白抗原成分较纯。Western blot结果显示, 纯化后带有His标签的EgG1Y162-2重组蛋白能被抗His单克隆抗体识别。结论成功构建了细粒棘球蚴pET30a-EgG1Y162-2原核表达重组质粒, 诱导表达了EgG1Y162-2重组蛋白, 为进一步开展抗细粒棘球蚴疫苗的研究奠定基础。

• 单位
  基础医学院; 新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院