miR-146a对父代高脂高糖饮食背景下子代新生鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响

作者：唐华; 党伟; 魏颖莉; 曹银利

来源：中华内分泌代谢杂志, 2019, (05).

• microRNA-146a
• 甲基化
• 胰岛素受体基因
• 高脂高糖饮食
• 雄性
• SD大鼠

目的 探讨miR-146a对父代高脂高糖饮食(HGFD)背景下新生鼠肝组织胰岛素受体(insr)基因表达的影响及作用机制。方法 取5周龄雄性SD大鼠随机分为：正常饮食组(ND组)及HGFD组,分组饲养3个月后与正常雌鼠交配。检测子代新生鼠血糖水平、葡萄糖耐量(GTT)及胰岛素耐量(ITT)。提取子代新生鼠肝组织miRNAs,合成cDNA。采用二代测序技术比较两组差异miRNAs,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)的方法验证这些miRNA的表达差异。提取子代新生鼠肝组织基因组DNA、总RNA及总蛋白,qPCR比较父代HGFD对子代新生鼠肝组织中INSR mRNA相对表达量及INSR启动子甲基化水平的影响,分别分析INSR表达及甲基化水平与差异分子miR-146a表达水平的相关性。上调大鼠正常肝细胞系BRL-3A中miR-146a,观察miR-146a对肝细胞中INSR基因启动子甲基化水平(qPCR)及蛋白表达(Western-blot)的影响。结果 HGFD组F1代雄性仔鼠葡萄糖耐量显著下降和胰岛素耐受。miRNA测序获得差异microRNAs 60个,HGFD组上调的45个,下调的15个。qPCR检测提示其中8个miRNAs在扩大样本中仍有显著性差异,miR-146a在HGFD组仔鼠肝中表达上调超过10倍。miRNA-146a的表达水平与INSR mRNA的相对表达量负性相关,与INSR甲基化水平正相关。上调BRL-3A细胞中miR-146a表达,INSR基因启动子区的甲基化水平显著增强而蛋白表达则受到抑制。结论 父代HGFD背景下F1代仔鼠肝组织中INSR表达抑制与miR-146a促INSR基因甲基化有关。

• 单位
  新乡医学院第一附属医院; 西安市精神卫生中心; 中国人民解放军空军军医大学