RNA干扰技术沉默上皮型钙黏蛋白表达对体外培养的喉癌Hep-2细胞增殖的影响

作者：孙静; 田军; 陈琪; 吴桂卿

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2016, 23(09): 507-514.

DOI：10.16066/j.1672-7002.2016.09.004

• RNA干扰
• 细胞增殖
• 喉肿瘤
• 钙粘蛋白

目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默喉癌HeP-2细胞上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,探讨E-cadherin对Hep-2细胞增殖能力的影响。方法设计、合成特异性小干扰RNA(siRNA)和无基因沉默功能的阴性siRNA转染Hep-2细胞,获得下调E-cadherin基因表达的体外培养的Hep-2细胞;荧光定量PCR检测E-cadherin基因的沉默效果;体外细胞增殖实验(MTT)检测Hep-2细胞体外增殖能力的变化。结果①重组质粒和脂质体质量体积按1:1转染时,转染效率最高组siRNA-3达65%。②荧光定量PCR:重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-siRNA1、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA2、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA3使E-cadherin mRNA的表达下调。以空白对照组为基准(设为1),E-cadherin相对于β-actin的改变倍数siRNA-1组=0.00092,siRNA-2组=0.00143,siRNA-3组=0.00045,阴性对照组=3.44898,差异有统计学意义。③MTT:经特异性siRNA处理的Hep-2细胞生长速度较对照组增快,差异有统计学意义。结论有效抑制Hep-2细胞E-cadherin mRNA的表达使Hep-2细胞的增殖能力增强。

• 单位
  青岛市市立医院; 潍坊市人民医院; 赣南医学院第一附属医院