原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

作者：王丽廷; 王兴童; 杨柳; 彭蔚宇; 孟兴; 陈洪岩; 高文伟; 韩凌霞

来源：实验动物科学, 2017, 34(03): 1-5.

• 鸡白介素-10
• 原核表达
• 鼠抗血清
• 体内实验

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 动物科技学院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 山西农业大学