广西假蒌ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选

作者：杨丹; 谢鲜丽; 黎艳茵; 谭勇; 黄鼎; 杜沛霖

来源：分子植物育种, 2022, 1-20.

• 广西假蒌
• ISSR
• 正交设计
• 引物筛选

为了确定广西假蒌ISSR-PCR最佳反应体系，本研究采用单因素和正交实验相结合的方法对影响广西假蒌ISSR-PCR反应体系的dNTPs、Mg~(2+)、引物、DNA模板、Taq聚合酶五个因素的浓度进行优化。研究结果表明各因素对广西假蒌ISSR-PCR反应体系影响大小依次为：Mg~(2+ )> 模板DNA >Taq聚合酶 >引物 > dNTPs。最佳反应体系为总体系20 μL，其中10×Buffer 2 μL、dNTPs 0.25 mmol/L、Mg~(2+) 2.0 mmol/L、引物 0.5 μmol/L、模板DNA 80 ng、Taq聚合酶1 U，双蒸水11.6 μL。在建立的最优体系基础上，从100条UBC引物中筛选出10条条带清晰、多态性好的引物并确定其最佳退火温度。本研究为后续进行广西假蒌遗传多样性、分子育种、种质资源鉴定等研究提供理论依据。

• 单位
  广西中医药大学