C9orf47-1重组蛋白的克隆表达及其对HepG2细胞周期的调控作用

作者：顾红岩; 孟雪; 李辉; 郝晓花; 李兴旺; 魏红山

来源：中国病原生物学杂志, 2014, 9(04): 364-371.

DOI：10.13350/j.cjpb.140419

• C9orf47-1
• HBV
• 分泌蛋白

目的克隆表达C9orf47-1蛋白,探索其可能的生物学功能。方法构建C9orf47-1原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;纯化目的蛋白,制备兔源多克隆抗体;采用生物信息学软件对C9orf47-1蛋白进行生物信息学分析;采用Western blot检测其在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况,及重组蛋白对HepG2细胞内质网应激的影响;采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响。结果 PCR扩增获得序列完全正确的C9orf47-1基因片段,构建的C9orf47-1原核表达载体能在大肠埃希菌中以包涵体的形式表达C9orf47-1重组蛋白;重组蛋白经Ni-NTA纯化后免疫大耳白兔,获得的多克隆抗体效价高达1∶640 000,并识别C9orf47-1蛋白;C9orf47-1蛋白在4种细胞系中均有表达,其中在HepG2和Jurkat中的表达量高于L02和LX2;重组蛋白未引起HepG2细胞的内质网应激,但可引起细胞周期的变化:延长G1、G2期,缩短S期(P<0.05)。结论 C9orf47-1重组蛋白具有抗原性,该蛋白对肝细胞周期(G2/S)有一定的阻滞作用。

• 单位
  北京地坛医院; 北京大学; 首都医科大学附属北京地坛医院