噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽

作者：徐富勇; 徐玲; 刘仁荣; 裘雪梅; 朱立鑫

来源：生物技术通报, 2013, (01): 144-150.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.01.016

• 噬菌体展示系统
• 玉米赤霉烯酮
• 模拟表位
• 肠激酶

拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN转化感受态XL1-Blue得到工程菌pC89-ek-zen,然后用KM13超感染、IPTG诱导表达,纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13超感染时菌体浓度OD600、IPTG诱导时菌体浓度OD600、IPTG加入量以及诱导表达温度和时间进行优化,以探索最佳表达条件;通过ELISA测定反应原性,对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN抗体的结合效果。结果显示,成功构建了表达载体pC89-CZEN,最优表达条件为KM13超感染时菌体浓度OD600为0.4、IPTG诱导时菌体浓度OD600为0.6以及IPTG加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h,酶切后结合效果明显高于酶切前。

• 单位
  江西科技师范大学; 生命科学学院; 南昌大学生命科学与食品工程学院