含PGK启动子慢病毒表达质粒的构建与鉴定

作者：周军智; 邹永康; ***; 刘楠乔; 蔡亚非; 王根林

来源：安徽师范大学学报(自然科学版), 2009, 32(02): 163-167.

• PGK启动子
• 慢病毒载体
• 基因表达 PGK promoter
• lentiviral vector
• gene expression

为了构建一个含有人源PGK1(human phosphoglycerate kinase 1)启动子的慢病毒表达载体pL-PGK-GFP.采用PCR从人组织中扩增PGK1基因的启动子部分,再用酶切-连接的方法将扩增的启动子区片段亚克隆入慢病毒表达质粒pL-EGFP中,再用测序、酶切和瞬时表达的方法进行鉴定.结果是下游的eGFP基因在PGK1启动子驱动下,在293FT细胞中表达绿色荧光蛋白报告基因,这表明成功构建了慢病毒表达质粒pL-PGK-GFP.扩增的537bp PGK1启动子片段具有一定的启动效率,能在HIV来源的慢病毒载体中驱动下游目的基因的表达.

• 单位
  南京农业大学; 安徽师范大学; 生命科学学院; 动物科技学院