HPV16阳性宫颈癌细胞株中miR-497-5p靶向PD-L1的免疫调控作用

作者：王亚菲; 杨英捷; 孙清华; 田琴; 任婕^*

来源：肿瘤预防与治疗, 2023, 36(03): 200-207.

• 子宫颈鳞癌
• 微小RNA
• 程序性死亡受体配体-1
• 人乳头瘤病毒16
• 免疫调控

目的：探讨miR-497-5p靶向PD-L1在HPV16阳性宫颈癌细胞株中的免疫调控作用。方法：通过免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）验证宫颈癌细胞中HPV16 E6和E7蛋白对PD-L1蛋白是否有直接作用；对宫颈癌组织差异表达的miRNA进行生信分析筛查；以TCGA宫颈癌数据为基础，探讨miRNA与预后之间的关系；E6、E7siRNA由上海吉玛制药技术有限公司设计合成，通过脂质体在HPV16阳性宫颈癌细胞株中转染E6、E7 siRNA，下调E6、E7的表达；构建E6、E7基因表达质粒，于HPV阴性子宫颈癌细胞株中表达E6、E7。利用qRT-PCR对不同组细胞表达miRNA进行检测；miR-497-5p mimics和inhibitor转染HPV16阳性宫颈癌细胞株，通过Western blot检测各组PD-L1蛋白的表达情况；通过预测软件，在PD-L1 mRNA 3’UTR上寻找miR-497-5p的作用靶点；利用双荧光素酶报告实验，验证miR-497-5p是否与PD-L1 mRNA 3’UTR靶向结合。结果：经Co-IP实验验证，HPV16 E6和E7对PD-L1无直接作用关系；在宫颈癌细胞中对E6和E7表达进行上调和下调后，发现E6、E7与hsa-miR-497-5p表达存在负调控关系；miR-497-5p mimics和inhibitor转染HPV16阳性宫颈癌细胞株后发现，hsa-miR-497-5p可抑制PD-L1蛋白的表达水平；hsa-miR-497-5p inbibitor可提高PD-L1蛋白的表达水平；双荧光素酶活性实验结果提示miR-497-5p可靶向结合PD-L1的3’-UTR序列。结论：HPV16 E6/E7可能通过miR-497-5P/PD-L1轴促进宫颈癌细胞免疫逃逸。

• 单位
  贵州医科大学; 贵阳市第二人民医院