7-木糖紫杉烷糖基水解酶Lxyl-p1-2基因突变库与高通量筛选体系的构建

作者：李慧仙; 朱平

来源：菌物研究, 2013, (02): 143.

DOI：10.13341/j.jfr.2013.02.003

• 糖基水解酶
• 易错PCR
• In-fusion技术
• 48微孔板高通量筛选

对7-木糖紫杉烷糖基水解酶Lxy-l p1-2基因进行定向进化的初步研究,确定易错PCR条件、优化克隆连接方法、建立基于48微孔板高通量筛选模型。利用易错PCR技术对Lxy-l p1-2基因进行随机突变,比较不同浓度Mg2+进行易错PCR,每组随机挑取10个克隆进行测序。序列分析表明:在Mg2+浓度为7 mmol/L条件下,碱基平均突变率为0.12%,即对于Lxy-l p1-2基因(2.4 kb)来说,每个基因序列平均有3个碱基突变,达到构建突变文库的频率要求,选择该条件作为易错PCR条件。利用in-fusion技术将Lxy-l p1-2突变基因克隆到pPIC3.5K载体中,获得大量重组突变质...

• 单位
  北京协和医学院; 药物研究所; 中国医学科学院; 天然药物活性物质与功能国家重点实验室