结缔组织生长因子-整合素α_νβ5受体信号途径在肺动脉平滑肌细胞外基质基因表达中的作用

作者：卢翠侠; 付杰; 李刚; 胡煜; 贾鹏; 赵建; 陈芃螈; 刘斌

来源：中国小儿急救医学, 2015, 22(03): 150-155.

• 整合素
• 结缔组织生长因子
• 肺动脉平滑肌细胞
• 细胞外基质
• 细胞外调节蛋白激酶
• 大鼠

目的探讨整合素ανβ5在结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)细胞外基质沉积中的作用;明确细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路是否参与了CTGF-整合素ανβ5信号途径所致PASMC上述生物学行为改变的过程;初步探讨CTGF-整合素ανβ5受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用。方法 (1)体外培养SD大鼠PASMC,并用α-SMA免疫组织化学染色鉴定细胞纯度。对照组:含10%胎牛血清的M199培养基;CTGF刺激组(CTGF组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/ml CTGF,培养72 h;CTGF+整合素ανβ5单克隆抗体P1F6(10 μg/ml)刺激组(抗体组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/ml CTGF+10 μg/ml P1F6,培养72 h。(2)实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、P1F6对CollagenⅠ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响。(3)采用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF对CollagenⅢ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达变化的影响。结果 (1)免疫组织化学染色显示,α-SMA染色阳性细胞大于95%,表明其为PASMC。(2)RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CTGF作用于PASMC 72 h,CTGF能显著促进CollagenⅠ-α1、Collagen Ⅲ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达(P<0.05);使用P1F6后与CTGF组比较,3种基因mRNA表达均减少(P<0.05),但均较对照组表达增加。(3)蛋白质印迹检测结果表明,CTGF作用于PASMC 72 h,与对照组比较CTGF明显促进CollagenⅢ蛋白表达(P<0.05);应用P1F6后Collagen Ⅲ蛋白表达较CTGF组减少(P<0.05),但较对照组表达增加。用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF作用PASMC 72 h后ERK1/2磷酸化水平,提示CTGF作用PASMC 72 h后ERK1/2磷酸化程度增加,加入P1F6封闭整合素ανβ5后ERK1/2磷酸化程度降低,pERK1/2与ERK1/2比值减小(P<0.05)。结论整合素ανβ5介导了CTGF诱导的PASMC细胞外基质沉积;ERK1/2信号通路参与CTGF-整合素ανβ5受体信号诱导的PASMC细胞外基质沉积,其可能在肺动脉高压肺血管重构中起重要作用,此途径可能是防止和干预肺动脉高压肺血管重构发生和发展的新靶点。

• 单位
  泸州医学院附属医院; 郑州市第一人民医院