miR-338-3p通过负性调节cPKCγ表达减轻小鼠神经元缺血损伤

作者：魏海萍; 郭佳; 葛朝明; 邵康梅; 王浩泰; 卢妮; 王欢^*

来源：基础医学与临床, 2020, 40(07): 917-922.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2020.07.006

• miR-338-3p
• 蛋白激酶Cγ
• 大脑中动脉阻断
• 氧糖剥夺

目的评估miR-338-3p对氧糖剥夺(OGD)/复糖复氧(R)神经元损伤的影响及其机制。方法建立小鼠脑中动脉阻塞(MCAO)和神经元氧糖剥夺(OGD)模型;Western blot检测1 h MCAO/R 24、48和72 h小鼠脑梗死区周围皮质(n=5)和1 h OGD/R 0、6、12和24 h神经元(n=5)cPKCγ蛋白表达量;实时定量PCR检测cPKCγ及miR-338-3p mRNA水平;生物信息学分析cPKCγ3′UTR与miR-338-3p结合位点;噻唑兰(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)法测定神经元(n=6)的存活率和凋亡率。采用免疫荧光与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测caspase-3蛋白表达情况。结果 1 h MCAO/R 24、48和72 h小鼠脑梗死区周围皮层和1 h OGD/R 0、6、12和24 h神经元中cPKCγ蛋白及mRNA水平均明显上升(P<0.001);cPKCγ3′UTR存在1个miR-338-3p结合位点,miR-338-3p与cPKCγmRNA水平呈相反趋势;过表达miR-338-3p后1 h OGD/R 24 h神经元存活率下降(P<0.001),调亡率上升(P<0.001),caspase-3蛋白平均荧光强度值增高(P<0.001),抑制miR-338-3p后1 h OGD/R 24 h神经元存活率上升(P<0.001),调亡率下降(P<0.001),caspase-3蛋白平均荧光强度值降低(P<0.001)。结论 miR-338-3p通过负性调节cPKCγ表达而使神经元存活率上升,凋亡率下降,减轻缺血神经元损伤。

• 单位
  神经内科; 兰州大学; 兰州大学第二医院; 第二临床医学院