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摘要
目的通过RNA干扰的方法确定最佳靶点用于NRP-1基因功能研究。在两株膀胱尿路上皮癌细胞中采用慢病毒干扰NRP-1基因表达,探讨NRP-1基因对膀胱尿路上皮癌细胞迁移和侵袭及血管新生能力的影响,为膀胱尿路上皮癌的发病机制,转移机制提供了理论基础。方法采用Western Blot筛选出两株NRP-1表达丰度较高的细胞。设计NRP-1的RNA干扰靶点,构建干扰载体并包装至慢病毒载体中,通过qPCR和Western Blot筛选出能同时在上述两株细胞中有效干扰NRP-1的最佳靶点。分别感染两株膀胱尿路上皮癌细胞对照慢病毒和干扰NRP-1基因慢病毒载体,通过Transwell及血管新生法验证NRP-1对膀胱尿路上皮癌细胞的侵袭,转移和促进周围血管新生能力。结果通过Transwell小室法发现,对照慢病毒感染的两株膀胱尿路上皮癌细胞体外的侵袭和迁移能力显著地高于NRP-1干扰慢病毒感染的细胞,NRP-1干扰对T24细胞的体外侵袭和迁移抑制率分别为51%和72%(P<0.05),NRP-1干扰对5637细胞的体外侵袭和迁移抑制率分别为61%和65%(P<0.05);通过血管新生实验发现,相较于对照病毒感染组,NRP-1干扰组两株膀胱尿路上皮癌细胞对血管内皮细胞的血管生成能力影响降低,干扰组对血管新生的调控能力下降率在T24和5637细胞中分别为21%和28%(P<0.05)。结论 NRP-1慢病毒RNA干扰对膀胱尿路上皮癌细胞的迁移和侵袭具有抑制能力,NRP-1干扰对膀胱尿路上皮癌细胞周围血管新生能力具有抑制能力。
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