胶原酶消化刮取再消化法分离培养犬静脉内皮细胞的实验研究

作者：李刚; 萧晗; 唐军建; 王峰; 游庆军

来源：河北医科大学学报, 2021, 42(01): 7-11.

DOI：10.3969/j.issn.1007-3205.2021.01.002

• 大隐静脉
• 内皮细胞
• 胶原酶类
• Ve-Cadherin抗原

目的探讨犬大隐静脉内皮细胞(endothelial cells,ECs)体外分离培养的新方法。方法通过将内膜翻转后结扎两端,0.1%胶原酶消化后刮下内皮层,用胶原酶再消化法获取内皮细胞,用低糖DMEM培养基再加入适量内皮细胞生长因子培养,以0.25%胰蛋白酶进行消化传代培养。用免疫荧光法、免疫组织化学法及光镜、扫描电镜法鉴定所得细胞系。结果本方法分离的细胞在体外培养2周后光镜下胞体呈单层铺路石状排列,免疫荧光和免疫组织化学检测Ve-Cadherin阳性,扫描电镜观察见细胞呈梭形以及细胞表面较多微绒毛。本方法与传统的Veronica Tisato分离法比较,细胞存活率显著提高[(75.39±12.61)%vs(47.28±9.59)%,P<0.01]。结论采用胶原酶消化刮取再消化法能可靠地获取纯化的犬大隐静脉ECs,获取的ECs在体外可以连续大量增殖传代。

• 单位
  江苏大学附属医院; 上海交通大学医学院附属第九人民医院