结核分枝杆菌mpt64基因稳定表达细胞系的建立

作者：柏银兰; 王丽梅; 杨芳; 薛莹; 樊爱琳; 康健; 张薇; 何俊杰; 徐志凯

来源：科学技术与工程, 2009, (08): 2047-2050+2055.

• 结核分枝杆菌
• mpt64
• 细胞
• 表达

为建立稳定表达结核分枝杆菌分泌蛋白MTP64的P815细胞系,将mpt64基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),构建mpt64真核表达载体。重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipofectamine2000转染P815细胞,通过G418筛选后,得到阳性克隆,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达,间接免疫荧光和Western-blot检测目的蛋白的表达。表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的真核表达载体转染细胞后,RT-PCR可扩增出目的基因片段,转染细胞间接免疫荧光检测阳性,Western-blot检测在约26 kDa处有特异显色条带,证实转染细胞表达目的基因。成功地建立mpt64稳定表达细胞系,为进一步结核疫苗评价奠定一定基础。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院