NR2F1-AS1靶向miR-212-3p/GSK-3β影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

作者：何宁^*; 唐长友; 周贤超

来源：现代免疫学, 2023, 43(02): 122-136.

• 核受体亚族2F组成员1的反义RNA 1
• 类风湿关节炎
• 滑膜成纤维细胞
• 微小RNA-212-3p
• 糖原合酶激酶3β
• 增殖
• 凋亡

为探讨核受体亚族2F组成员1的反义RNA 1(nuclear receptor subfamily 2 group F member 1 antisense RNA 1,NR2F1-AS1)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast, SF)增殖和凋亡的影响及可能的机制，首先以正常SF为对照，采用qRT-PCR检测RA-SF中NR2F1-AS1和miR-212-3p表达，Western blotting检测糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)蛋白表达，然后转染NR2F1-AS1小干扰RNA、miR-212-3p模拟物、GSK-3β小干扰RNA或共转染NR2F1-AS1小干扰RNA与miR-212-3p抑制剂至RA-SF,用CCK-8法检测细胞增殖，FACS检测细胞凋亡，Western blotting检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)表达，双荧光素酶报告基因试验验证NR2F1-AS1与miR-212-3p及miR-212-3p与GSK-3β的调控关系。结果显示，与正常SF比较，RA-SF中NR2F1-AS1、GSK-3β蛋白表达升高(P<0.001),miR-212-3p表达降低(P<0.001);敲减NR2F1-AS1、过表达miR-212-3p或敲减GSK-3β的RA-SF活性和PCNA蛋白表达降低(P<0.001),而凋亡率和cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.001);NR2F1-AS1靶向结合miR-212-3p,且敲减NR2F1-AS1的RA-SF中miR-212-3p表达升高(P<0.05),GSK-3β蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3β是miR-212-3p的靶基因，且过表达miR-212-3p的RA-SF中GSK-3β蛋白表达降低(P<0.05);敲减miR-212-3p降低了敲减NR2F1-AS1对RA-SF活性、凋亡及PCNA、cleaved-Caspase-3蛋白表达的影响。该研究提示，NR2F1-AS1可能通过靶向调控miR-212-3p/GSK-3β轴促进RA-SF增殖并阻碍其凋亡，其可能成为RA治疗的分子靶点。

• 单位
  长沙市第四医院