细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定

作者：李娟; 唐刘君; 王晓辉; 查欣; 胡中倩; 邢小翠; 杨晓明; 汪思应

来源：安徽医学, 2012, (02): 136-140.

• CDCA3蛋白
• RNA干扰
• shRNA
• 载体构建 CDCA3
• RNA interference
• Short hairpin RNA
• Vector construction

目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚...

• 单位
  蛋白质组学国家重点实验室; 北京蛋白质组研究中心; 安徽医科大学; 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所