miR-942-5p靶向TRAF6对病毒性心肌炎细胞损伤的影响

作者：杨婷^*

来源：中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2021, 11(04): 215-221.

• miR-942-5p
• TRAF6
• 病毒性心肌炎
• 凋亡
• 炎症反应

目的探讨miR-942-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)对病毒性心肌炎细胞损伤的影响。方法体外分离培养BALB/c小鼠心肌细胞,采用柯萨奇病毒B3 (CVB3)感染心肌细胞,建立病毒性心肌炎细胞模型,将细胞分为对照组 (未感染CVB3病毒)、CVB3组(感染CVB3病毒)、CVB3+miR-NC组 (感染CVB3病毒,转染miR-NC)、CVB3+miR-942-5p组 (感染CVB3病毒,转染miR-942-5p)、CVB3+si-NC组 (感染CVB3病毒,转染si-NC)、CVB3+si-TRAF6组 (感染CVB3病毒,转染si-TRAF6)、CVB3+miR-942-5p+pcDNA组 (感染CVB3病毒,转染miR-942-5p和pcDNA)和CVB3+miR-942-5p+TRAF6组 (感染CVB3病毒,转染miR-942-5p和TRAF6)。采用实时定量聚合酶链反应 (qRT-PCR)检测细胞中miR-942-5p和TRAF6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法 (Western blot)检测TRAF6、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X (Bax)蛋白表达水平;噻唑蓝比色法 (MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;ELISA检测肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的表达;双荧光素酶报告实验验证miR-942-5p和TRAF6的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果与对照组相比,CVB3组的miR-942-5p表达量 (0.97±0.06比0.36±0.03)、细胞活力 (98.10﹪±8.67﹪比44.61﹪±5.30﹪)、Bcl-2蛋白表达 (0.93±0.06比0.38±0.03)均降低;TRAF6 mRNA (0.96±0.08比2.14±0.21)和蛋白表达 (0.86±0.07比1.69±0.17)、细胞凋亡率 (8.92﹪±1.13﹪比26.27﹪±2.24﹪)、Bax蛋白表达 (0.94±0.06比1.67±0.156)、TNF-α(56.70±5.56比97.62±8.89)、IL-1β (38.42±4.01比86.91±8.09)均升高,差异有统计学意义 (P均< 0.05);与CVB3+miR-NC组比较,CVB3+miR-942-5p组细胞活力 (41.24﹪±4.71﹪比65.32﹪±5.81﹪)、Bcl-2蛋白表达(0.41±0.04比0.64±0.05)均升高,细胞凋亡率 (25.67﹪±1.19﹪比14.22﹪±1.46﹪)、Bax蛋白表达 (1.70±0.16比1.29±0.12)、TNF-α (103.68±9.82比78.44±6.68)、IL-1β (81.27±7.81比57.43±4.78)均降低 (P均< 0.05);与CVB3+si-NC组比较,CVB3+si-TRAF6组细胞活力 (50.32﹪±4.94﹪比68.32﹪±6.44﹪)、Bcl-2蛋白表达 (0.39±0.04比0.63±0.05)均升高,细胞凋亡率 (23.86﹪±1.82﹪比16.34﹪±1.27﹪)、Bax蛋白表达 (1.73±0.15比1.26±0.15)、TNF-α (86.08±8.04比63.42±5.89)、IL-1β (74.48±6.88比55.64±5.18)均升高 (P均<0.05)。miR-942-5p可以靶向TRAF6的表达,过表达TRAF6可以逆转过表达miR-942-5p对CVB3诱导的病毒性心肌炎细胞的活力、凋亡和炎症反应的影响。结论　miR-942-5p可以通过靶向调控TRAF6的表达减轻CVB3感染心肌细胞的凋亡和炎症反应。

• 单位
  山西省运城市中心医院