草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体制备及其特异性分析

作者：汤亚方; 曾伟伟; 王庆; 王英英; 石存斌; 冯茹; 高辉; 王承宝

来源：淡水渔业, 2018, 48(01): 9-14.

DOI：10.13721/j.cnki.dsyy.2018.01.002

• 草鱼呼肠孤病毒
• VP6蛋白
• 多克隆抗体

为了制备高效的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体并对其特异性进行鉴定,实验以草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型HZ08株为模板,采用PCR方法扩增S9基因,将该S9基因与p ET-32a(+)载体连接构建p ET-32a-S9原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导表达;纯化后的重组VP6蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,使用间接ELISA方法测定抗体效价,Western blot和IFA试验鉴定抗VP6蛋白多克隆抗体特异性。结果显示草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的S9基因在原核表达载体中能够正确地表达VP6蛋白,纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备的抗VP6多克隆抗体,经间接ELISA方法测定其效价约为1∶105,Western blot和IFA试验结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别GCRVⅡ型毒株,而不能识别GCRV I型、Ⅲ型以及其它病毒,表明该多克隆抗体具有较高的特异性。研究表明制备的抗VP6蛋白多克隆抗体能够特异性识别GCRVⅡ型病毒,为GCRVⅡ型病原学研究及草鱼出血病临床诊断奠定基础。

• 单位
  西北农林科技大学; 中国水产科学研究院; 农业部; 中国水产科学研究院珠江水产研究所