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摘要
目的探究芪珍胶囊对人结肠癌细胞HCT116及裸鼠移植瘤模型的作用及机制。方法 HCT116细胞给予芪珍胶囊进行干预,采用MTT法和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况;采用Western blotting法考察芪珍胶囊对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、剪切型Caspase-9(cleaved Caspase-9)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、磷酸化m TOR(p-mTOR)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK、细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellular signal regulated kinase,ERK)、p-ERK、p38和p-p38蛋白表达的影响;采用qRT-PCR法检测芪珍胶囊对程序性死亡分子配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)m RNA表达的影响。建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,考察芪珍胶囊对裸鼠体质量、瘤体积和瘤质量的影响;采用ELISA法检测各组裸鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、TNF-α、IL-6、CD68、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和PD-L1 mRNA表达;采用Western blotting法考察各组裸鼠肿瘤组织PD-L1蛋白表达。以γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)诱导HCT116细胞,考察芪珍胶囊对细胞存活率及PD-L1蛋白表达的影响。结果芪珍胶囊显著抑制HCT116细胞存活率(P<0.01、0.001),显著促进细胞凋亡(P<0.01、0.001),显著下调细胞中Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05、0.01),显著上调细胞中cleaved Caspase-9、cleaved PARP、p-mTOR/mTOR、p-AMPK/AMPK、p-ERK/ERK和p-p38/p38蛋白表达水平(P<0.05、0.01、0.001),显著下调细胞中PD-L1m RNA表达水平(P<0.05)。结肠癌裸鼠移植瘤模型中,芪珍胶囊显著抑制移植瘤生长(P<0.05、0.01),降低氟尿嘧啶导致的裸鼠体质量减轻,显著降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P<0.05、0.01、0.001),显著降低肿瘤组织中NF-κB、TNF-α、IL-6、CD68、MCP-1、i NOS和PD-L1m RNA表达水平(P<0.05),显著降低肿瘤组织中PD-L1蛋白表达水平(P<0.01)。芪珍胶囊显著抑制IFN-γ诱导的HCT116细胞中PD-L1蛋白表达水平(P<0.001)。结论芪珍胶囊能够通过诱导细胞凋亡、抑制炎性反应及PD-L1表达等途径抑制结肠癌的发生发展,可能是一种潜在的免疫检查点抑制剂。
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