β冠状病毒通用RT-PCR检测方法建立及昆明地区动物带毒状况调查

作者：邓晏琼; 李德氾; 李晓红; 宋春莲; 舒相华; 齐晓朋; 陈培富^*

来源：生物学杂志, 2023, 40(01): 74-78.

DOI：10.3969/j.issn.2095-1736.2023.01.074

• 哺乳动物
• β冠状病毒
• RNA依赖性RNA聚合酶
• 逆转录-聚合酶链式反应

为调查昆明地区猪、牛及鼠β冠状病毒携带状况及充当重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)-2中间宿主的可能性，建立基于β冠状病毒属RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的特异性逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法，并用于2020—2021年昆明9个县区具有呼吸道或消化道症状的猪(186份)、牛(164份)及随机捕获的鼠(140份)的β冠状病毒核酸检测；对RdRp阳性样品进一步进行SARS-CoV-1和SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因特异性扩增。建立的RT-PCR方法能特异扩增β冠状病毒属各病毒种，对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度为310个质粒拷贝；应用该法检测的490份样品中，猪、牛、鼠的β冠状病毒检出率分别为5.91%、9.76%和8.57%,但RdRp阳性样品未检出SARS-CoVs的S基因同源片段。成功建立可特异检测β冠状病毒属的通用RT-PCR方法，应用该法联合S基因扩增调查昆明地区猪、牛及鼠，未发现其携带与SARS-CoVs的S基因有联系的β冠状病毒。

• 单位
  中国科学院昆明动物研究所; 云南农业大学