骨髓间充质干细胞诱导肝细胞耐受肝功能衰竭血清细胞毒性的研究

作者：顾劲扬; 施晓雷; 袁献温; 张悦; 肖江强; 丁义涛

来源：中华实验外科杂志, 2014, 31(02): 308-311.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.02.029

• 肝细胞
• 生物人工肝
• 骨髓间充质干细胞
• 共培养

目的探讨与骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养的肝细胞可耐受慢加急性肝功能衰竭患者血清的细胞毒性,以及共培养细胞对肝功能衰竭血清的肝功能支持作用。方法收集慢性乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭患者血清(n=18)及正常志愿者血清(n=18)。建立猪肝细胞与BMSCs最适共培养体系。实验分为4组:肝功能衰竭血清单纯肝细胞培养组(Hep-F)、肝功能衰竭血清共培养组(Co-F)、正常人血清单纯肝细胞培养组(Hep-N)和正常人血清共培养组(Co-N)。血清浓度依次为10%、20%、40%、60%、80%和100%。培养24 h后收集上清液检测白蛋白水平和肝细胞周期确定最合适的肝功能衰竭血清浓度。观察细胞生长状态、超微结构及细胞活力。分别检测60%浓度血清培养组超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、符氨酰胺(GLN)和胆碱酯酶((CHE)水平。更换为含10%胎牛血清的完全培养基继续培养24 h,收集Hep-FB、Co-FB、Hep-NB和Co-NB组上清液,重复检测SOD、LDH、GLN和CHE水平。结果共培养组肝细胞在60%浓度的肝功能衰竭血清中贴壁数量最多,呈岛状聚集生长。肝细胞表达白蛋白水平最佳,G2S期细胞比例升至32.08%,细胞内超微结构接近正常,细胞活力较对照组明显改善。Co-F组SOD、GLN和LDH水平与Co-N组之间差异无统计学意义(P>0.05),仅CHE水平有所下降,但与Hep-F组比较显著提高。Co-FB组LDH、GLN、CHE活性较Hep-F组有显著改善。结论与BMSCs共培养的肝细胞可耐受中高浓度慢加急性肝功能衰竭血清的细胞毒性,有效维持肝细胞功能。

• 单位
  南京大学医学院附属鼓楼医院