稳定表达hTERT/Luc的小鼠黑色毒瘤肺转移模型的建立

作者：肖毅; 高江平; 高昆; 阎瑾琦; 张亮; 王宇; 徐元基; 王晓雄; 于继云

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(01): 89-92.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006723

• 荧光素酶
• hTERT
• 活体成像
• 移植瘤

目的建立稳定共表达荧光素酶基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并通过尾静脉注射的方式建立小鼠肿瘤肺转移模型。方法利用DNA重组技术将hTERT基因和荧光素酶基因Luc定向插入到真核表达载体,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT和pIRES-hyg3-Luc,利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000共转染小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418及潮霉素B加压筛选出稳定转染的细胞株。应用Western blot法及免疫荧光法检测hTERT和Luc基因在B16细胞中的表达;将稳定共表达hTERT和Luc的B16-hTERT/Luc细胞株通过尾静脉注射的方式接种雄性C57BL/6小鼠建立肿瘤肺转移模型,并通过活体成像技术检测小鼠肺部肿瘤的生长。结果建立了稳定共表达hTERT和Luc的小鼠黑色素瘤B16单克隆细胞株B16-hTERT/Luc,经检测hTERT基因和荧光素酶基因Luc在单克隆细胞株中的表达分别为84%和98%。通过尾静脉注射的方式成功建立了小鼠肿瘤肺转移模型,应用活体成像技术能方便地检测到B16-hTERT/Luc肿瘤在小鼠体内的生长情况。结论成功建立了可用于活体成像技术检测的稳定表达hTERT的小鼠黑色素瘤肺转移模型。

• 单位
  解放军总医院; 军事医学科学院基础医学研究所; 中国医学科学院