H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

作者：张民秀; 谢芝勋^*; 李孟; 罗思思; 谢志勤; 谢丽基; 李丹; 阮志华

来源：中国家禽, 2023, 1-7.

• 禽流感病毒
• M2e蛋白
• 蛋白表达
• 单克隆抗体

为制备H9N2亚型禽流感病毒（AIV）多拷贝M2e蛋白单克隆抗体，试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠；取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合，采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株；将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水；采用间接ELISA测定腹水效价，鼠源MAb亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水，三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Western blot鉴定单克隆抗体的特异性；使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示：获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5；获得腹水的效价均为1∶1 000 000；三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Western blot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应；IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达，并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染，出现特异性的绿色荧光；三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体，可用于Western blot和IFA鉴定，为靶向M2e蛋白H9N2亚型AIV疫苗的研究提供特异性的检测工具。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所