P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生

作者：常晶; 滕嘉雯; 孙文翠; 曾加辉; 张勇刚; 潘旭; 周涯; 赖默温; 边国慧; 周琼秀; 刘嘉馨; 陈波^*; 马峰^*

来源：中国输血杂志, 2019, 32(03): 222-227.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2019.03.002

• 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂[CDKN1A(P21)]
• 多西环素(DOX)
• 真核诱导过表达系统
• 人胚胎干细胞(hESC)
• 主动脉-性腺-中肾(AGM)基质细胞
• 造血发生

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34-CD43+、CD34-CD45+与CD34+CD45+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 实验血液学国家重点实验室; 四川大学; 生物治疗国家重点实验室