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摘要
目的 原核表达纯化山羊凝乳酶(CYM)蛋白，制备针对凝乳酶蛋白的多克隆抗体并进行抗体验证。方法 将pET-32a-TEV-CYM重组质粒转化至表达菌Escherichia coli BL21(DE3),用IPTG诱导重组凝乳酶蛋白表达，并通过镍柱亲和层析纯化、TEV酶酶切等方法获得凝乳酶蛋白。将纯化的凝乳酶蛋白免疫新西兰大白兔，以获得针对凝乳酶蛋白的多克隆抗体。通过ELISA检测凝乳酶抗体与重组凝乳酶蛋白的特异性免疫反应。结果 重组凝乳酶蛋白可被IPTG诱导表达，亲和层析纯化获得高纯度的凝乳酶蛋白。该蛋白在新西兰大白兔体内能够诱导产生多克隆抗体，且能与重组凝乳酶蛋白特异结合。结论 成功原核表达纯化出重组凝乳酶蛋白并制备相应兔多克隆抗体，为后续开发天然凝乳酶含量检测试剂盒提供了基础。
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