池蝶蚌IκBα和c-Rel的结构特征及在LPS刺激下的表达分析

作者：王小敏; 周叶; 马慧妹; Zahid Anwar; 胡蓓娟; 彭扣; 洪一江

来源：水生生物学报, 2022, 1-15.

• 池蝶蚌
• HsIκBα
• Hsc-Rel
• 克隆
• 蛋白互作
• LPS刺激

在淡水贝类的NF-κB / Rel信号通路中，核因子κB（Nuclear factor-κappaB，NF-κB）和NF-κB抑制因子（Inhibitors of NF-κB，IκB）的功能尚未清楚。本研究对池蝶蚌（Hyriopsis schlegelii）IκBα和c-Rel（以下简称HsIκBα和Hsc-Rel）的序列结构、表达特征以及HsIκBα和Hsc-Rel之间的相互关系进行了分析。结果表明，HsIκBα的cDNA全长为1783 bp，其开放阅读框（Open Reading Frame， ORF）为1083 bp，编码360个氨基酸。Hsc-Rel的cDNA为2414 bp，ORF为2298 bp，编码765个氨基酸。通过构建HsIκBα-ORF-GST和Hsc-Rel-RHD-HIS重组质粒、原核诱导表达和纯化，进行GST-pull down，通过SDS-PAGE和western blot检测研究，发现HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用。通过对池蝶蚌进行脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激后，分别在7个时间点（0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h）对10个组织中HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA表达差异性进行分析，结果显示：HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA在所有组织都有表达，且在肝胰腺组织表达最高，在血细胞表达最低。在6 h时，HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调；在12 h时，HsIκBα在10个组织中的表达量都上调，并且都达到了峰值。Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺、肠出现上调；在24 h时，HsIκBα在10个组织中的表达值呈现下调，Hsc-Rel却都出现上调（肾组织除外），其中血细胞、斧足、肠的表达值达到峰值；在36-72 h，HsIκBα和Hsc-Rel的部分组织的表达值逐渐恢复到基础水平。

• 单位
  南昌大学; 生命科学学院