羊口疮病毒青海QH02株ORF011基因的克隆、原核表达及鉴定

作者：耿嘉谦; 贾怀杰; 陈国华; 何小兵; 房永祥; 景志忠^*; 王晓霞^*

来源：中国病毒病杂志, 2019, 9(03): 188-194.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2019.0030

• 羊口疮病毒
• ORF011基因
• 克隆
• 生物信息学分析
• 原核表达

目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进行预测,并将基因构建至pET-32a(+)原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),挑取阳性克隆测序正确后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot验证重组蛋白反应原性。结果 PCR扩增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重组蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式存在,重组蛋白相对分子质量为60×103,且纯度较高,Western-blot检测结果表明目的蛋白具有较好的反应原性。结论构建的原核表达系统可以成功表达B2L蛋白,经Western-blot验证具有良好的反应原性,可作为羊口疮防控产品研发的候选分子。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 兰州大学; 公共卫生学院; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室