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摘要
东南亚十二节段RNA病毒属为呼肠孤病毒科中的一个新属，该属包括版纳病毒（BAV）、芒市病毒（MSV）、卡皮罗病毒（KDV）和辽宁病毒（LNV）四种病毒。为建立上述四种病毒的群特异性核酸检测方法，本研究根据BAV、MSV、KDV和LNV毒株VP12基因序列的保守区，设计特异性引物和TaqMan探针，建立了荧光定量qRT-PCR和常规RT-PCR检测方法，并分别进行了特异性、灵敏性和重复性的检测。实验结果表明，两种检测方法分别对四种病毒均有特异性的扩增和荧光信号检出，而对流行性出血病病毒（EHDV）、蓝舌病病毒（BTV）、中山病病毒（CHUV）、广西环状病毒（GXOV）、阿卡斑病毒（AKAV）、云南环状病毒（YUOV）等病毒无扩增和无有效荧光信号检出，具有较好的特异性。灵敏性实验结果显示，荧光定量qRT-PCR检测四种病毒核酸的下限可达10 copies/μL，常规RT-PCR的检测下限为102 copies/μL，荧光定量方法灵敏度是常规方法的10倍。四种病毒荧光定量qRT-PCR方法的组内和组间重复试验标准差均小于0.8，变异系数均小于3%，表明该方法均具有良好的稳定性。以上结果表明，本研究建立的BAV、MSV、KDV和LNV四种病毒的荧光定量qRT-PCR和常规RT-PCR方法具有快速、准确、稳定等优点，可为四种病毒的早期诊断、快速检测、流行病学调查和实验研究等提供有效的技术方法。
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