pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒的构建及其在A549细胞中的表达

作者：谭家余; 罗雅玲; 黄湘; 孙海霞

来源：解放军医学杂志, 2008, (11): 1329-1332.

• PSMA7蛋白
• 人
• 质粒
• 真核细胞
• 肿瘤细胞
• 培养的
• A549细胞 PSMA7 protein
• human
• plasmids
• eukaryotic cells
• tumor cells
• cultured
• A549 cells

目的构建pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒并建立人肺腺癌细胞株A549的稳定表达株。方法采用RT-PCR法从正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7中克隆得到PSMA7 cDNA全长序列,将之与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将PSMA7片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上。构建好的pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入A549细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用RT-PCR及Western blotting法检测转染后PS-MA7的mRNA及蛋白表达水平。结果pcDNA3.1(-)/PSMA7质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因PSMA7的序列完全正确,真核表达质粒构建成功。RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的PSMA7 mRNA表达水平(2.698±0.661)明显高于未转染组(1.243±0.176)和转染pcDNA3.1(-)组(1.198±0.514,P<0.05),后两者间无明显差异。Western blotting检测同样显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的蛋白表达水平(1.978±0.661)明显高于未转染组(0.891±0.234)和转染pcDNA3.1(-)组(0.782±0.375,P<0.05),后两组间亦无明显差异。结论成功构建了PSMA7基因的真核表达质粒,并建立了稳定表达PSMA7的A549细胞株,为后续研究奠定了基础。

• 单位
  嘉应学院医学院; 南方医科大学