科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
背景 种子细胞和支架材料是角膜组织工程研究的主要课题.脂肪干细胞具有来源广泛、增生和分化能力强的特点而成为目前组织工程种子细胞的研究热点,聚羟基乙醇(PLGA)作为高分子可降解支架材料已成功用于构建多种组织器官.目的 探讨兔脂肪干细胞的生物学特性及其复合多孔支架材料聚羟基乙醇(PLGA)的生物相容性,为进一步构建脂肪干细胞组织工程化角膜基质提供实验基础.方法 取雌性新西兰大白兔颈背部脂肪组织,采用消化法分离培养兔脂肪细胞,传至第4代.将传代细胞分别以3×104/cm2、3×104/cm2、3×106/cm2的密度接种于6孔板中,分别用成骨诱导培养液、成脂诱导培养液及成软骨诱导液进行诱导培养,并分别以质量分数1%茜素红-Tris-盐酸溶液、质量分数0.6%油红染液和免疫荧光法鉴定培养细胞的多向分化能力.将第4代细胞用稀释的DiO荧光染液重悬的脂肪干细胞按1×107/ml的密度接种于自制的多孔PLGA支架形成细胞-生物材料复合物,Hoechst法定量检测细胞在支架上的生长情况,并分别于接种后第1、3、7天对细胞-生物材料复合物行共焦显微镜和扫描电子显微镜检测,观察细胞在该支架上的黏附生长和基质分泌情况,评价PLGA的生物相容性.结果 原代培养的脂肪细胞7～8d后可达80% ～90%融合,呈成纤维细胞样外观.传代第4代的细胞成骨诱导2周后茜素红染色显示矿化结节及周围细胞着深红色;成脂诱导2周后油红O染色显示细胞质内布满红色脂滴颗粒;微团培养成软骨诱导2周后,免疫荧光染色结果显示Ⅱ型胶原表达阳性.细胞接种至PLGA支架材料第7天增生达到高峰期,扫描电子显微镜和共焦显微镜检测显示细胞在支架上贴附生长良好,能够在支架表面及孔隙内壁得到充分伸展和生长,细胞外基质分泌旺盛.结论 培养的兔脂肪细胞具有脂肪干细胞的多向分化功能,与多孔PLGA支架复合具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程化角膜基质的种子细胞和支架材料.
-
单位上海组织工程研究与开发中心; 上海交通大学
