摘要
目的 采用生物信息学方法分析EB病毒潜伏膜蛋白LMP1,为疫苗的研发提供理论依据。方法 在NCBI数据库中获取LMP1蛋白的基因组序列和氨基酸序列,采用生物信息学分析工具ProtParam、SOPMA、SWISS MODEL、SignalP、TMHMM、Cell-PLoc 2.0、NetNGly、NetPhos-3.1、Conserved domains、IEDB、BLAST、Immunomedicine Group、UniProt预测LMP1蛋白的理化性质,二、三级结构,信号肽和跨膜区域,亚细胞定位,糖基化位点和磷酸化位点,保守结构域,B、T细胞表位,同源性,抗原决定簇以及相互作用蛋白。构建重组质粒LMP1-pMV261以及重组卡介苗,并通过检测LMP1分子及蛋白表达水平探究构建疫苗的基本条件。结果 LMP1蛋白分子式为C1901H2877N493O562S11,氨基酸数为386,相对分子质量为41.98238×103,原子总数为5 844。LMP1蛋白为稳定亲水蛋白,二级结构主要为无规则卷曲(Cc),占49.48%,易与抗体嵌合。该蛋白无信号肽,具有6个跨膜区,亚细胞定位在宿主细胞膜,无糖基化位点,有27个磷酸化位点,7个相互作用蛋白。实时荧光定量PCR及Western blot检测该蛋白基因及蛋白表达均稳定。结论 生物信息学分析LMP1蛋白为稳定亲水蛋白,含有丰富的B、T细胞表位,构建的重组卡介苗蛋白表达稳定,可作为EB病毒的候选疫苗。
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单位基础医学院; 济宁医学院